Introduction : Le transfert de Southern est l’une des techniques centrales en biologie moléculaire. D’abord mis au point par E M Southern (1975), le transfert de Southern a pour résultat le transfert de molécules d’ADN, habituellement des fragments de restriction, d’un gel d’électrophorèse à une feuille de nitrocellulose ou de nylon, de telle sorte que […]

Les enzymes agissant sur l’ADN peuvent être regroupées en quatre grandes classes, en fonction du type de réaction qu’elles catalysent: 1) Les nucléases sont des enzymes qui coupent, raccourcissent ou dégradent les molécules d’acide nucléique. 2) Les ligases rejoignent les molécules d’acide nucléique. 3) Les polymérases produisent des copies des molécules. 4)Les enzymes modificatrices éliminent […]

Des efforts considérables ont été déployés pour développer  des systèmes de vecteurs pour le clonage des cellules animales. Ces vecteurs sont nécessaires en biotechnologie pour la synthèse de protéines recombinantes à partir de gènes qui ne sont pas exprimés correctement lorsqu’ils sont clones dans E. coli ou la levure et les méthodes de clonage chez […]

Les principes fondamentaux de la préparation de l’ADN sont plus faciles à comprendre en examinant d’abord le type le plus simple de procédure de purification d’ADN, celui où le complément d’ADN entier d’une cellule bactérienne est nécessaire. Les modifications nécessaires pour la préparation d’ADN de plasmide et de phage peuvent ensuite être décrites ultérieurement. La […]

La PCR est une technique très simple: tout ce qui se passe est qu’une petite région d’une molécule d’ADN, par exemple un seul gène, est copiée à plusieurs reprises par une enzyme ADN polymérase. Cela peut sembler un exercice plutôt trivial, mais il a une multitude d’applications dans la recherche génétique et dans des domaines […]

Ces vectors de clonage ont été développés dans les années 80 et leur utilisation a conduit à la  culture des OGM (organismes génétiquement modifiées). Trois types de vecteurs ont été utilisés avec plus ou moins de succès pour le clonage des  Plantes :  Vecteurs à base de plasmides naturels d’Agrobacterium. Transfert direct de gène en utilisant […]

La levure Saccharomyces cerevisiae est l’un des organismes les plus importants dans la biotechnologie. Outre son rôle dans le brassage et la fabrication du pain, la levure a été utilisé comme un organisme hôte pour la production de produits pharmaceutiques importants à partir de gènes clonés. Dans un premier temps le développement des vecteurs de […]

Mettre l’ADN dans les cellules Après que la séquence d’ADN à cloner a été joint au vecteur approprié, l’hybride doit être transféré dans des cellules pour l’amplification biologique. Le phénomène de la transformation des pneumocoques par l’ADN est connue depuis 1944. Une fois les propriétés génétiques souhaitables d’ E.coli ont été réalisées, elle aussi a été testée […]

Vecteurs: la Sélection et réplication  autonome de l’ ADN : Le clonage d’un morceau d’ADN exige qu’il soit répliqué quand il est remis dans les cellules. D’où l’ADN à cloner doit lui-même être une unité répliquante indépendante, un réplicon ou doit être joint à un réplicon. De plus, étant donné que l’efficacité de l’introduction de l’ADN dans des cellules est bien […]

Définition : Les termes du génie génétique et l’ADN recombinant se réfèrent à des techniques dans lesquelles l’ADN peut être coupé, rejoint, sa séquence déterminée ou la séquence d’un segment modifié en fonction de l’utilisation prévue. Par exemple, un fragment d’ADN peut être isolé d’un organisme, joint à d’autres fragments d’ADN, et mis dans une […]